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麥?zhǔn)媳葷峁芄烙?jì)懸液中的細(xì)菌濃度

發(fā)布時(shí)間： 2019-12-09　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4101次

在我們?nèi)粘５奈⑸餀z測(cè)工作和進(jìn)行的某些實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常會(huì)遇到需要預(yù)估細(xì)菌懸液的細(xì)菌濃度問題，有時(shí)候我們需要精確計(jì)數(shù)細(xì)菌菌液濃度，會(huì)用到血球計(jì)數(shù)板來進(jìn)行計(jì)數(shù)；但有時(shí)我們只需要一個(gè)比較粗略的估計(jì)值即可，這里小編推薦大家使用麥?zhǔn)媳葷岱ā?/span>
麥?zhǔn)媳葷峁苁荕cFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的，有表可查，這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同，且都有定值。麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔热缦拢?/span>
這是傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁艿呐渲品椒?，目前也有市售的商品化產(chǎn)品，不需要自己配制，并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥?zhǔn)媳葷峁埽c傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁芟啾龋４鏁r(shí)間更長也更穩(wěn)定。但麥?zhǔn)媳葷峁芫唧w應(yīng)該怎么使用呢？
麥?zhǔn)媳葷峁芄烙?jì)懸液中的細(xì)菌濃度具體操作方法
1、輕搖標(biāo)準(zhǔn)試管。
2、無菌操作將被測(cè)定的肉湯培養(yǎng)物加到與標(biāo)準(zhǔn)管相同直徑（大小）的無菌試管中。
3、以無菌操作向被測(cè)定試管加入無菌生理鹽水（NaCl），直到濃度與所要求的標(biāo)準(zhǔn)管的濃度相同。
4、直接用眼睛看（需要經(jīng)驗(yàn)，誤差較大）。
5、找張白紙，打上平行直線，然后觀察讀數(shù)（如圖示，利用光在不同濃度液體折射不同）。
例如，需配大約100cfu/mL 的細(xì)菌菌液濃度：
1. 無菌操作用接種環(huán)挑取測(cè)試細(xì)菌的純培養(yǎng)物到盛有一定量無菌生理鹽水管中，混懸。
2. 以比色卡作為背景目測(cè)，直到濁度與0.5 麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管的濁度相一致，如上圖所示。
3. 0.5 號(hào)麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相當(dāng)于1×108CFU/mL 濃度，以此為參照值，取1mL 濁度跟0.5 號(hào)麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相一致的菌懸液到9mL 無菌生理鹽水管中，作10 倍梯度稀釋107、106、105……，102 稀釋度含菌量大約為100cfu/mL。
注：1. 測(cè)試菌的純培養(yǎng)物可以是凍干菌株復(fù)蘇后純培養(yǎng)物。
2.本法僅供細(xì)菌液濃度的粗略計(jì)算。
注意事項(xiàng)：
1、如果測(cè)定的肉湯培養(yǎng)物不澄清，由培養(yǎng)物的值減去未接種培養(yǎng)基的值來校正細(xì)菌濃度。
2、如果肉湯顏色很深，把未接種試管放在標(biāo)準(zhǔn)管的后面讀數(shù)即可。
3、測(cè)定好的細(xì)菌，可以做一下梯度稀釋涂布計(jì)數(shù)。
4、此種方法測(cè)定的準(zhǔn)確性不是很高，如果是對(duì)細(xì)菌數(shù)量要求較精確的，請(qǐng)用紫外分光光度計(jì)。
5、麥?zhǔn)媳葷嵋簯?yīng)放室溫暗處保存，用前混勻，有效期為6個(gè)月。應(yīng)用時(shí)為了準(zhǔn)確也可以使用比濁儀但一定要防止麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管未搖勻或已過期失效。
在微生物學(xué)檢驗(yàn)中，麥?zhǔn)媳葷岱ǔＷ鳛榧?xì)菌鑒定、實(shí)驗(yàn)配制菌液時(shí)大致判斷細(xì)菌菌液濃度的一種方法，通常認(rèn)為，如將配細(xì)菌菌液濃度配成0.5麥?zhǔn)媳葷峁軙r(shí)，相當(dāng)于1.0×108細(xì)菌數(shù)/ml，由于方法本身就是一種估計(jì)的方法，所以盡管不同細(xì)菌大小差異很大，但除了真菌孢子，細(xì)菌的差別不大，結(jié)果不會(huì)有影響。
附孢子菌懸液制作方法：
1. 菌種活化
將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中，培養(yǎng)7d～14d，使生成大量孢子。未制備孢子懸液時(shí)，不得拔去棉塞。每打開1支只供制備1次懸液，每次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的霉菌孢子。
2. 孢子懸液制備
在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水，用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子，將孢子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi)，然后注入40mL洗脫液。
錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?！?5粒與孢子混合，具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團(tuán)的孢子散開，然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中，用離心機(jī)分離沉淀孢子，去上清液。再加入40mL洗脫液，重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.8～1.2)×106spores/mL的霉菌孢子懸液。若需要精確計(jì)數(shù)，則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用，若不在當(dāng)天使用應(yīng)在 3℃～7℃保存，并盡量在4d內(nèi)使用。

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